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Hiper HotStart Taq DNA Polymerase是经过配体修饰的热稳定Taq DNA Polymerase，该配体可以随温度变化来调节DNA聚合酶活性。在室温下酶活性被完全封闭，经95℃加热后活性才被释放，这样可防止在样品准备及反应升温阶段产生非特异扩增和引物二聚体。Hiper HotStart Taq DNA Polymerase的激活时间只需要2～3min，兼容现有的PCR程序。

Hiper HotStart Taq DNA Polymerase的反应缓冲液中的组分、浓度都经过优化，使得引物与模板结合的严谨性提高，从而最大程度的减少非特异扩增和引物二聚体，非常适合低拷贝模板的扩增。PCR产物3’端带A，可克隆至T载体。

• 配制反应体系
  各成分使用前需充分融化混匀，按下表加入各成分配制50μL反应体系。
  

  成分		用量	终浓度
  HS PCR Buffer(with Mg2+)		X μL	1×
  dNTP Mix (10mM each)		1μL	0.2mM
  模板DNA	基因组DNA	50ng～200ng	-
  	质粒DNA	100pg～20ng
  	cDNA	1～5μL
  Forward primer (10μM)		2μL	0.4μM
  Reverse primer (10μM)		2μL	0.4μM
  Hiper HotStart Taq DNA Polymerase(50U/μL)		0.05μL	2.5U/50μL
  ddH2O		至50μL	-

  
  注：
  
  • 根据具体的实验应用，需自备相应的反应Buffer。
    
  • 聚合酶浓度：推荐使用2.5U/50μL。可以在1.25～5U/50μL之间进行优化。
    
  • PCR增强剂(货号：SY0040)使用：推荐仅当扩增片段GC含量>60%且优化条件也无法正常扩增时使用。
    
  • Mg²⁺终浓度：体系终浓度为2mM。如有特殊需要，可用25mM MgCl₂，以0.2～0.5mM为间隔向上摸索。
• PCR扩增程序
  

  步骤	温度	时间	循环数
  预变性	95℃	5min	1
  变性	95℃	30sec	35
  退火	50～60℃	30sec
  延伸	72℃	30sec/kb
  终延伸	72℃	10min	1

  
  注：
  
  • 退火温度和时间：温度推荐使用50～60℃。退火温度过低会导致非特异性扩增。引物设计参考荧光定量引物标准。推荐退火时间设置为30sec，可以在10～30sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度和时间。
    
  • 延伸温度和时间：温度推荐使用72℃。时间推荐使用30sec/kb。
    
  • 扩增产物：请将PCR扩增产物放置于-20℃保存，防止DNA发生降解。